Enterobaktēriju un dažu vibrāciju diferenciālā noteikšanā Voges-Proskauer reakcija ieņem īpašu vietu. Tests ir balstīts uz baktēriju spēju fermentēt glikozi, veidojot acetoīnu.
Pētīšanas procesa būtība
Mikrobioloģijā Voges-Proskauer reakciju bieži izmanto, lai diferencētu Yersinia ģimenes enterobaktērijas (tostarp pseidotuberkulozes un enterokolīta patogēnus), Escherichia coli un sporas veidojošos aerobus. Rezultāts tiek vizualizēts, krāsojot barotni, kad tiek pievienoti noteikti reaģenti.
Šis tests pieder IMViC sērijai (saīsinājums no Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - identifikācijas testu grupai, tostarp diferenciālām definīcijām:
- ar indolu, pamatojoties uz triptofāna sadalīšanos indolā, ko izmanto Kovača vai Ērliha reaģenta klātbūtnē;
- izmantojotmetilrots jeb metilsarkanais, kas nosaka noteiktu pH glikozes metabolizācijas rezultātā;
- Voges-Proskauer reakcijas acetilmetilkarbinola noteikšanai;
- citrāta izmantošana ar krāsas maiņu barotnes sārmināšanas rezultātā.
Procesa būtība ir diagnosticēto baktēriju klātbūtnes vizualizācija, pateicoties to veidotajam acetoīnam mijiedarbībai ar kodīgo potašu skābekļa klātbūtnē. Acetilmetilkarbinols tiek oksidēts par diacetilu, kas veido spilgti sarkanu vai rozā savienojumu. Pirms kodīgā potaša pievienošanas palieliniet testa jutību, ievadot alfa-naftolu.
Pārbaudes iestatījums
Vogēzes-Proskauera reakcijas formulējums ietver mikroorganismu iepriekšēju kultivēšanu. Tīrkultūru sēj uz Klārka diferenciāldiagnostikas barotnes, kuras variācija ir Klārka buljons (bez agara-agara pievienošanas). Tiek izmantots vai nu gatavs barotne, vai sagatavots neatkarīgi. Sastāvdaļas:
- 5g peptona;
- 5g glikozes;
- 5g kālija divbāziskā fosfāta;
- 1L destilāta.
Pētījuma laikā kultūra tiek inokulēta ar sterilu bakterioloģisko cilpu šķidrā barotnē. Daudzums - 5 ml mēģenē plus kontrole. Inkubācija tiek veikta 35-37 grādu temperatūrā divas dienas. Tālāk tiek veikts Voges-Proskauer reakcijas pētījums pa posmiem:
- 2, 5 ml buljona kultūras pārnes sterilā mēģenē.
- Pievienojiet sešus pilienus alfa-naftola (5% spirta šķīduma).
- Pievienot 40%kaustiskā kālija šķīdums 0,1 ml daudzumā vai divi pilieni.
- Maisīšanu veic, viegli kratot mēģeni.
- Novērtējiet rezultātu pēc 15 minūtēm pēc eksperimenta sākuma.
Alternatīva testa metode ir inkubācija uz nakti, kuras laiks tiek samazināts līdz 18 stundām vai līdz dienai. Papildus šai metodei izmanto arī eksprestestu: kultūru cilpā ievada 2 ml barotnes, inkubē apmēram četras stundas, pēc tam pievieno reaģentus vienādā daudzumā 2-3 pilienus, samaisa un rezultāts tiek novērtēts pēc desmit minūtēm.
Kontrole ir viens no pneimonijas Klebsiella pneumoniae izraisītājiem - celms atcc 13883.
Rezultāta novērtējums
Pēc vajadzīgā laika pēc reaģentu pievienošanas (no 5 līdz 15 minūtēm) jānovēro ķiršu sarkana krāsa ar izteiktu pozitīvu reakciju, sarkana un rozā - ar vāju pozitīvu reakciju. Nekādas izmaiņas netiek reģistrētas kā negatīvs rezultāts.
Kaustiskā potaša pārpalikums šķīdumā var radīt pozitīvas reakcijas imitāciju, iekrāsojoties vara krāsā. Šādā gadījumā jāreģistrē pārbaudītās kolonijas negatīvā atbilde. Arī vara iekrāsošanās parādās gadījumos, kad novērtējums tiek sniegts stundu pēc reaģentu ievadīšanas.
Izvērtējot rezultātu, jāņem vērā, ka pētāmo mikroorganismu ilgstoša kultivēšana (vairāk nekā trīs dienas) noved pie barotnes paskābināšanās, kas var novest pie nepareiza pētījuma iznākuma. Reakcija var būt nedaudz pozitīva vaikļūdaini negatīvs.
Prasības testa reaģentiem
Voges-Proskauer reaģentiem jāatbilst tādām prasībām kā pareiza koncentrācija, augsta tīrība un stabilitāte, kas tiek panākta, pareizi uzglabājot.
Lietošanai gatavie testa komplekti parasti satur reaģentus 100 vai vairāk lietojumiem, un tie tiek piegādāti plastmasas vai tonēta stikla flakonos. Kvalitāti regulē attiecīgā dokumentācija.
