Baktēriju izpēte prasa rūpīgu darbu ar daudzām iekārtām un instrumentiem. Lai mikroorganismi laboratorijas apstākļos vairotos pēc iespējas ātrāk un spētu uzturēt normālu dzīvībai svarīgo aktivitāti, tiek izmantotas īpašas barotnes. To sastāvs un biofizikālie apstākļi ir piemēroti baktēriju kultūras aktīvai augšanai.
Uzturvielu barotne. Mikrobioloģija un citi lietojumi
Baktēriju kolonijas audzē laboratorijā uz Petri trauciņiem, kas pildīti ar želejveida vai pusšķidru saturu. Tās ir uzturvielu barotnes, kuru sastāvs un īpašības ir pēc iespējas tuvākas dabiskajām kvalitatīvai ražas augšanai.
Šādas vides tiek izmantotas mikrobioloģiskajos pētījumos un medicīnas diagnostikas laboratorijās. Pēdējie visbiežāk strādā ar patogēno vai oportūnistisko baktēriju uztriepes, kuru sistemātiskā atrašanās vieta tiek noteikta tieši iestādē.
Dabīgs un sintētisksTrešdiena
Pamatnoteikums darbā ar baktērijām ir pareiza barotnes izvēle. Tam jāatbilst daudziem kritērijiem, tostarp mikro- un makroelementu saturam, fermentiem, nemainīgai skābuma vērtībai, osmotiskajam spiedienam un pat skābekļa procentuālajam daudzumam gaisā.
Uzturvielu barotnes iedala divās lielās grupās:
- Dabiskā vide. Šādus maisījumus gatavo no dabīgām sastāvdaļām. Tas var būt upes ūdens, augu daļas, kūtsmēsli, dārzeņi, augu un dzīvnieku audi, raugs utt. Šādai videi raksturīgs augsts dabisko ķīmisko vielu saturs, kuru daudzveidība veicina baktēriju kultūras augšanu. Neskatoties uz šīm acīmredzamajām priekšrocībām, dabiskā vide neļauj veikt specializētus pētījumus ar specifiskiem baktēriju celmiem.
- Sintētiskie datu nesēji. Tie atšķiras ar to, ka to ķīmiskais sastāvs ir zināms precīzās visu sastāvdaļu attiecībās. Šādas barotnes ir sagatavotas konkrētai baktēriju kultūrai, kuras metabolisms pētniekam ir zināms iepriekš. Faktiski šī iemesla dēļ ir iespējams sagatavot šādu sintētisku vidi mikroorganismu attīstībai. Tos izmanto, lai analizētu baktēriju dzīvībai svarīgo aktivitāti. Piemēram, var uzzināt, kādas vielas un cik daudz tās izdala vidē. Mikroorganismi augs arī dabiskajos barotnēs, taču nav iespējams izsekot kvantitatīvām sastāva izmaiņām, jo nav zināms vielu sākotnējās proporcijas.
Diferenciālā-diagnostikas vides
Strādājot ar baktērijām, var izmantot ne tikai parasto uzturvielu barotni. Mikrobioloģija ir plaša zinātne, un tāpēc, veicot pētījumu, dažkārt kaut kādu iemeslu dēļ ir nepieciešams veikt mikroorganismu atlasi. Diferenciāldiagnostikas barotņu izmantošana laboratorijā ļauj atlasīt vēlamās baktēriju kolonijas uz Petri šķīvja atbilstoši to vitālās aktivitātes bioķīmiskajai pazīmei.
Šādu vidi sastāvs vienmēr ietver šādas sastāvdaļas:
1. Uzturvielas šūnu augšanai.
2. Analizētais substrāts (viela).
3. Indikators, kas piešķirs raksturīgu krāsu, kad notiek noteikta reakcija.
Piemērs ir diferenciāldiagnostikas barotne "Endo". To izmanto, lai atlasītu baktēriju kolonijas, kas var noārdīt laktozi. Sākotnēji šai barotnei ir sārta krāsa. Ja mikroorganismu kolonija nespēj noārdīt laktozi, tā iegūst ierasto b alto krāsu. Ja baktērijas var noārdīt šo substrātu, tās iegūst raksturīgu spilgti sarkanu krāsu.
Izvēles trešdienas
Diagnostikas laboratorijas bieži strādā ar tamponiem, kas satur daudz dažādu baktēriju veidu. Acīmredzot kvalitatīvam darbam ir kaut kā jāatlasa mums vajadzīgās kolonijas no desmitiem nepiederošu. Šeit var palīdzēt baktēriju augšanas barotne, kas ir ideāli izstrādāta, lai atbalstītu tikai viena veida mikroorganismus.
Piemēram,šāda izvēles vide ir piemērota tikai Escherichia coli pavairošanai. Pēc tam, iesējot daudzas baktērijas uz Petri trauciņa, mēs redzēsim tikai tās pašas Escherichia coli kolonijas un ne vairāk. Pirms darba uzsākšanas ir labi jāpārzina pētāmās baktērijas vielmaiņa, lai to veiksmīgi atlasītu no citu sugu maisījuma.
Cieta, puscieta un šķidra barotne
Baktērijas var audzēt ne tikai uz cieta substrāta. Uzturvielu barotnes atšķiras viena no otras savā agregācijas stāvoklī, kas ir atkarīgs no sastāva ražošanas laikā. Sākotnēji tiem visiem ir šķidra konsistence, un, pievienojot noteiktu procentuālo daudzumu želatīna vai agara, maisījums sacietē.
Šķidrās barotnes parasti atrodas mēģenēs. Ja šādos apstākļos rodas nepieciešamība audzēt baktērijas, pievienojiet šķīdumu ar kultūras paraugu un pagaidiet 2-3 dienas. Rezultāts var atšķirties: veidojas nogulsnes, parādās plēve, uzpeld mazas pārslas vai veidojas duļķains šķīdums.
Blīvu barotni bieži izmanto mikrobioloģiskajos pētījumos, lai pētītu baktēriju koloniju īpašības. Šādas barotnes vienmēr ir caurspīdīgas vai caurspīdīgas, lai būtu iespējams pareizi noteikt mikroorganismu kultūras krāsu un formu.
Mediju sagatavošana
Substrātus, piemēram, gaļas-peptona maisījumus uz buljona, želatīna vai agara bāzes, ir ļoti viegli pagatavot. Ja nepieciešams izveidot cietu vai pusšķidru substrātu, pārvēršiet to šķidrumāpievieno attiecīgi 2-3% vai 0, 2-0, 3% želatīna vai agara. Tiem ir liela nozīme maisījuma sacietēšanā, taču tie nav barības vielu avots. Tādējādi tiek iegūta barības vielu barotne, kas ir piemērota baktēriju kultūras audzēšanai.
