Bakteriālu infekciju daudzveidība prasa skaidru patogēna identifikāciju un tā sugu definīciju. Noteikt mikroorganisma veidu mikrobiologiem palīdz tā tinctorial īpašības - mikroba uzņēmība pret iekrāsošanos ar dažādām krāsvielām. Šī metode ļauj izpētīt patogēna morfoloģiju. Baktēriju krāsas īpašībām ir liela nozīme praktiskajos un teorētiskajos pētījumos mikrobioloģijas jomā.
Mikrobu pētījumi
Bakterioloģijā ir daudzas metodes mikroorganismu krāsošanai. Visi no tiem ir balstīti uz baktēriju tinctorial īpašībām. Krāsošana ļauj noteikt to formu, struktūru, izmēru, relatīvo stāvokli. Tas ļauj atrisināt vispārējās bioloģijas un salīdzinošās mikrobioloģijas mikroorganismu tipu sistematizēšanas problēmas.
Kāpēc tos krāsot
Baktērijas ir praktiskicaurspīdīgi organismi, un, neizmantojot krāsošanu, tie ir slikti redzami parastajai mikroskopijai. Objektu pētīšanai var izmantot īpašus mikroskopijas veidus (fāzes kontrasts, tumšs lauks), taču vienkāršākais veids ir iekrāsot, pēc tam baktērijas kļūst redzamas parastajā gaismas mikroskopā.
Parauga sagatavošana
Neatkarīgi no izmantotās krāsošanas tehnikas, pētāmā objekta sagatavošanai ir vienoti noteikumi. Šie posmi ir obligāti:
- Sterili instrumenti veido smērējumu uz stikla priekšmetstikliņa.
- Paraugs tiek žāvēts. To veic istabas temperatūrā vai izmantojot žāvēšanas skapjus.
- Seko fiksācijas posms - mikroorganismus piestiprina pie stikla ar speciāliem savienojumiem.
- Pareiza krāsošana - paraugu uz noteiktu laiku pārklāj ar krāsvielu, pēc tam to nomazgā.
- Galīgā žāvēšana - paraugs atkal tiek žāvēts.
Visizplatītākās krāsvielas
Visbiežāk izmantotās krāsvielas ir uz anilīna bāzes ar dažādām skābes vērtībām (pH). Lielākā daļa krāsvielu ir pulveri, kas ir atšķaidīti spirtā.
Krāsvielas, kurās katjoni ir krāsvielas, sauc par bāziskām (pH lielāks par 7). Tos var izmantot, lai iekrāsotu mikroorganismus sarkanā (fuksīna, safranīna), violetā (metilvioletā, tionīna), zilā (metilēnzilā), zaļā (malahīta zaļā), brūnā (hrizoidīna) un melnā (indulīna) krāsās.
Krāsvielas, kurās krāsvielas ir anjoni, sauc par skābām (pH mazāks par 7). Tie iekrāsos paraugu sarkanā (eozīns), dzeltenā (pikrīns) vai melnā (nigrozīna) krāsā.
Ir neitrālu krāsvielu grupa (piemēram, rodamīns B), kur gan katjoni, gan anjoni darbojas kā krāsvielas.
Kultūra mirusi vai dzīva
Krāsošanas metodes ir iedalītas divās grupās pēc pētāmā parauga dzīvības formas.
- Būtiska (dzīves laikā) krāsošana. Šī mikroorganismu īpašību izpētes metode tiek izmantota dzīvo audu izpētē, kas ļauj novērot mikrobu dzīvībai svarīgos procesus. Šai krāsošanai tiek izmantotas krāsvielas ar zemu toksicitāti un augstu iespiešanās spēju.
- Pēcvitālā krāsošana. Tā ir mirušu vai nogalinātu mikroorganismu krāsošana. Pateicoties baktēriju tinctorial īpašībām, mikrobiologi nosaka to struktūru. Tieši šo krāsojumu izmanto visplašāk.
Grampozitīvs un gramnegatīvs
Tieši šīs baktēriju īpašības ir atrodamas dažādu medikamentu instrukcijās. Šī baktēriju tinctorial īpašību izpētes metode ir balstīta uz genciānas violetas krāsas izmantošanu un joda fiksāciju. Tā ir Hansa Kristiana Grama, dāņu ārsta, kurš to ierosināja 1884. gadā, paņēmiens. Šīs krāsošanas rezultātā baktērijas tiek sadalītas divās grupās:
- Grams (+) - kļūst zils(stafilokoki un streptokoki).
- Gram (-) - traips no rozā līdz sarkanam (enterobaktērijas, salmonellas, E. coli).
Atšķirīgus krāsošanas rezultātus nosaka dažādas baktēriju sieniņu krāsas īpašības. Grama traipu metode joprojām ir galvenā dažu infekcijas slimību diagnostikā.
Citas krāsošanas metodes
Raksturosim vēl dažas bakterioloģijā plaši izmantotas metodes.
- Ziehl-Nelson metode - nosaka baktēriju skābes izturību. Tas identificē tuberkulozes un mikobakteriozes izraisītājus.
- Romanovska-Giemsa tehnika - acidofilās (etiķskābes un pienskābes) baktērijas iekrāso sarkanā krāsā, bet bazofīlās (spirohetas un vienšūņi) zilā krāsā.
- Morozova tehnika - iekrāso baktērijas brūnā krāsā un padara redzamas to flagellas.
Sporas var redzēt
Tsiel fuchcin krāsojums ļauj redzēt baktēriju sporas. Pēc krāsošanas tie ir rozā krāsā, un tie ir skaidri redzami uz zilo baktēriju fona. Šī metode ir arī bakterioloģijas instruments, un tai ir liela praktiska nozīme.
